– Ежовик. Ноотропные функции

Ежовик гребенчатый / Lion’s Mane / Львиная Грива.

Ежовик гребенчатый. Про результаты.

ЕЖОВИК. Природный грибной ноотроп

Многим людям сейчас очень сложно сосредоточиться на работе — высокий уровень стресса, огромный поток информации, недосып и «осенняя хандра» сводят продуктивность на нет. Наш мозг нуждается в поддержке, и вряд ли есть гриб, который справится с этой задачей лучше, чем ежовик гребенчатый — рекордсмен по ноотропным свойствам.

В мае 2023 года группа ученых провела масштабный обзор более 100 научных исследований о свойствах ежовика. Статья, опубликованная на PubMed, (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37233262/) содержит огромное количество подтвержденных фактов о ноотропном, нейропротекторном и дргугих полезных эффектах ежовика. Мы поделимся с вами самыми интересными из них:

• Эринацины и герициноны — уникальные соединения, содержащиеся только в ежовике, стимулируют (https://www.mdpi.com/2072-6643/11/4/715) нейрогенез (образование новых нервных клеток), в том числе в пожилом возрасте. Проникая (https://www.mdpi.com/1420-3049/24/8/1624) через гематоэнцефалический барьер, они оказываются в мозге уже через считанные часы после приема внутрь.

• Эринацин А стимулирует (https://www.mdpi.com/1422-0067/18/8/1659) фактор роста нервов (NGF), отвечающий за образование новых нейронных связей (ключевой механизм нейропластичности), защищает (https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0023643815301080?via%3Dihub) нервные клетки от гибели и улучшает (https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/01616412.2018.1556494) способность аксонов к регенерации.

• Ежовик помогает устранить (https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S2186495014000108?via%3Dihub) когнитивные нарушения, вызванные длительным приемом антидепрессантов.

• В ежовике высокое содержание (https://www.mdpi.com/1420-3049/24/19/3511) эрготионеина — сильнейшего антиоксиданта, который наш организм не вырабатывает самостоятельно. Исследования показали, что эрготионеин способен (https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S027869151000606X?via%3Dihub) восстанавливать нарушения памяти, за счет подавления окислительного стресса.

БАД. Не является лекарственным препаратом. Перед применением необходима консультация специалиста.

* * * * * * *

ПОДРОБНО:

Химические компоненты Hericium erinaceus способствуют выживанию нейронов и потенцируют рост нейритов через путь TrkA/Erk1/2.

Ключевая лаборатория натуральных продуктов и химической биологии Шэньси, Колледж химии и фармации, Северо-Западный университет A&F, Янлин 712100, Китай
Факультет фармацевтических наук Университета Токусима Бунри, Токусима 770-8514, Япония
Авторы, которым следует адресовать корреспонденцию.
Эти авторы внесли одинаковый вклад в эту работу.
Поступила: 29 июня 2017 г. / Отредактировано: 24 июля 2017 г. / Принято: 25 июля 2017 г. /
Опубликовано: 30 июля 2017 г.
(Эта статья относится к специальному выпуску « Биоактивные фитохимические вещества и функциональные пищевые ингредиенты во фруктах и ​​овощах», 2017 г.
Hericium erinaceus – кулинарно-лекарственный гриб, традиционно используемый в Восточной Азии для улучшения памяти. В данной работе мы исследовали нейропротекторное и нейритогенное действие вторичных метаболитов, выделенных из МеОН-экстракта культивируемого мицелия H. erinaceus , и задействованные в этом первичные механизмы. Были получены одно новое соединение дигидропиридина ( 6 ) и один новый природный продукт ( 2 ) вместе с пятью известными соединениями ( 1 , 3 – 5 , 7 ), а их структура выяснена методами спектроскопического анализа, включая 2D ЯМР и МСВР. Клеточный скрининг биологической активности показал, что метиловый эфир 4-хлор-3,5-диметоксибензойной кислоты ( 1 ) и циатандитерпеноид, эринцин А ( 3 ), не только усиливают NGF-индуцированный рост нейритов, но также защищают нейронально-дифференцированные клетки от депривация NGF в клетках феохромоцитомы PC12. Кроме того, соединение 3 индуцировало нейритогенез в нейронах первичной коры головного мозга крыс. Кроме того, наши результаты показали, что TrkA-опосредованные и Erk1/2-зависимые пути могут быть вовлечены в 1- и 3- стимулируемый NGF-индуцированный рост нейритов в клетках PC12.
Ключевые слова:

Графическая абстракция

1. Введение

Нейротрофины (НТ), такие как фактор роста нервов (NGF), широко исследовались на предмет их существенного вклада в выживание и дифференцировку нейрональных клеток [ 1 , 2 ]. Появляется все больше доказательств того, что уменьшение количества NT является важным фактором в патогенезе нейродегенеративных заболеваний (ND) [ 3 ]. Фактически, генетическая или прямая индукция NGF уже признана перспективным методом лечения болезни Ньюкасла [ 4 , 5 ]. Однако высокая молекулярная масса NGF ограничивает его доставку через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Следовательно, малые молекулы, имитирующие NGF или усиленные NGF, демонстрируют значительный терапевтический потенциал благодаря своим фармакологическим преимуществам [ 6 , 7 ].
Hericium erinaceus (Бюлл.: Fr) Pers — съедобный и лекарственный гриб, широко потребляемый в азиатских странах, и в последнее время ему уделяется все больше и больше внимания из-за его выдающихся нейротрофических и нейропротекторных свойств [8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 ] . В анализах in vitro сообщалось , что экстракты H. erinaceus стимулируют синтез NGF и/или способствуют NGF-индуцированному росту нейритов в различных типах клеток [ 14 , 15 ]. В анализах in vivo плодовые тела H. erinaceus продемонстрировали значительную активность против деменции [ 16 , 17 ]. Водный экстракт плодовых тел также способствовал регенерации поврежденных нервов на модели крыс Sprague-Dawley [ 18 ].
Фактически активные компоненты, полученные из H. erinaceus , как и других грибов, можно разделить на две группы в зависимости от их молекулярной массы [ 10 ]. Эринацины и гериценоны представляют собой типичные небольшие молекулы со значительными нейротрофическими и нейропротекторными эффектами и высокой способностью проникать через ГЭБ [ 19 , 20 ]. Эринацины AI показали более сильную способность увеличивать экспрессию мРНК при синтезе NGF, чем адреналин в качестве положительного контроля в мышиных астроглиальных клетках [ 21 ]. Сообщалось также, что эринацин P, Q и их биосинтетически родственные соединения индуцируют синтез NGF [ 21 ]. In vivo эринацин А, циатандитерпеноид, очевидно повышал уровень NGF в голубом пятне крысы и гиппокампе, за исключением коры головного мозга [ 22 ]. Кроме того, эринацин А эффективно предотвращал апоптоз PC12, вызванный инсультом глутамата [ 23 ]. Эринацин А также защищал нейроны от гибели, ингибируя нитротирозинсодержащие белки, фосфорилирование митоген-активируемых протеинкиназ p38 (MAPK), CCAAT/энхансер-связывающего белка (C/EBP) и гомологичного белка (CHOP) в крысиной модели глобального ишемический инсульт [ 24 ]. Прежде всего, эти результаты показали, что эринацин А является одним из определенных элементов, ответственных за стимулирование синтеза NGF и нейропротекторную активность H. Erinaceus , что может быть дополнительно подтверждено тем фактом, что эринацин А был способен явно уменьшать патологии при болезни Альцгеймера ( мышиные модели AD) и болезни Паркинсона (PD) [ 25 , 26 ]. Однако мало что известно о прямой нейритогенной активности и ее подробном механизме функциональных эринацинов, таких как эринацин А.
Целью данного исследования было изучение потенциальных нейропротекторных и нейритогенных эффектов метилового эфира 4-хлор-3,5-диметоксибензойной кислоты ( 1 ) и эринацина А ( 3 ), компонентов экстрактов культивированного мицелия H. erinaceus , на клетки PC 12 в виде а также первичные культивированные нейроны коры головного мозга крысы. Кроме того, задействованные сигнальные пути были выявлены путем мониторинга уровня фосфорилирования, а также морфологических изменений клеток, вызванных селективными ингибиторами. Наша гипотеза заключается в том, что соединения 1 и 3 могут усиливать активацию тирозинкиназы А (TrkA), запускаемую NGF, чтобы способствовать росту нейритов путем активации связанной нижестоящей передачи сигналов, такой как внеклеточная протеинкиназа 1/2, регулируемая сигналами (Erk1/2), которая необходим для роста нейритов в клетках PC12.

2. Результаты и обсуждение.

2.1. Структурное выяснение соединений 1–7

Одно новое соединение ( 6 ), один новый природный продукт 3-(гидроксиметил)-2-фуральдегид ( 2 ) и пять известных соединений, а именно метиловый эфир 4-хлор-3,5-диметоксибензойной кислоты ( 1 ) [ 27 ], эринацин А. ( 3 ) [ 28 ], геририн III ( 4 ) [ 29 ], гериерин IV ( 5 ) [ 29 ] и эринацерин G ( 7 ) [ 30 ] были выделены из МеОН-экстракта мицелия H. erinaceus ( рис. 1 ). Идентификация известных соединений проводилась путем сравнения их спектральных данных с приведенными в литературе.


Рисунок 1. Структуры соединений 1 – 7 из Hericium erinaceus .

оединение 6 было выделено в виде белого аморфного порошка. Его молекулярная формула была определена как C 8 H 9 NO 3 по данным HRCIMS при m / z 168,0658, [M + H] + (рассчитано для C 8 H 10 NO 3 , 168,0661) с пятью степенями ненасыщенности ( рис. S1) . ). Его ИК-спектр показал полосы поглощения гидроксила и NH (3354 см -1 ), сопряженного C=O (1659 см -1 ) и сопряженной двойной связи (1626 см -1 ) ( рис. S2 ). В спектре ЯМР 1 Н наблюдались резонансы, соответствующие метиловому протону [ δ H 2,69 (3H, с)), азотистым метиленовым протонам [ δ H 4,73 (2H, д, J = 4,9 Гц)], двум олефиновым протонам [ δ H 6,88 ( 1H, д, J = 0,5 Гц), 8,90 (1H, с)], один протон карбоновой кислоты [ δ H 12,56 (1H, с)] ( табл. 1 ). В спектре ЯМР 13 С ( табл. 1 ) наблюдались резонансы, соответствующие метиловому углероду ( δ C 26,4), азотистому метиленовому углероду ( δ C 64,2), четырем олефиновым углеродам ( δ C 109,3, 116,6, 152,1, 166,1), одному карбоксильному карбонилу. углерод ( δ C 168,3) и один кетонкарбонильный углерод ( δ C 203,8) ( таблица 1 ).
Таблица 1. Данные 1 H (600 М Гц, CDCl 3 ) и 13 С ЯМР (150 М Гц, CDCl 3 ) 6 .
Его корреляции COSY между NH/H-6 показали наличие фрагмента –NH–CH 2 – ( рисунок 2 ). Наличие 1,2-дигидропиридинового кольца было подтверждено корреляциями HMBC от H-2 до C-3, от H-4 до C-3, C-5 и от H-6 до C-2, C-. 5. Карбоксильная группа располагалась при C-3 ( δ C 116,6) из-за корреляций HMBC между протоном карбоксильной группы и C-3, а также H-4 и C-9 ( δ C 168,3). Оставшаяся ацетильная группа была помещена в положение C-5 ( δ C 166,1), что было подтверждено корреляциями HMBC H-8 с четвертичным углеродом C-5 ( таблица 1 ). Вышеупомянутые данные позволили нам определить структуру 6 как 5-ацетил-1,6-дигидро-3-пиридинкарбоновой кислоты (соответствующие спектры ЯМР можно увидеть на рисунках S3–S7 ).
Рисунок 2. Ключевые корреляции 1 H- 1 H COSY и HMBC 6 и 2
Соединение 2 было получено в виде желтого масла, и его молекулярная формула была определена как C 6 H 6 O 3 с помощью HREIMS. В спектре ЯМР 1 Н наблюдались резонансы, соответствующие протону кислородсодержащего метилена [ δ H 4,72 (2H, с)], двум олефиновым протонам [ δ H 6,52 (1H, д, J = 3,5 Гц), 7,22 (1H, д, J = 3,5 Гц)] и протон альдегида [ δ H 9,58 (1H, с)]. В спектре ЯМР 13 С наблюдались резонансы, соответствующие кислородсодержащему метиленовому углероду ( δ C 57,8), четырем олефиновым углеродам ( δ C 110,2, 123,0, 152,5, 160,8) и альдегидному углероду ( δ C 177,9). Анализ 1 H ЯМР и корреляций COSY между H-4/H-5 ( рис. 2 ) выявил наличие 2,3-дизамещенного фуранового кольца при δ H 6,52 (1H, d, J = 3,5 Гц), 7,22 ( 1H, д, J = 3,5 Гц). Корреляции HMBC между H-4 ( δ H 6,52) и C-2, C-3 и C-5, а также H-5 ( δ H 7,22) и C-2, C-3 и C-4 подтвердили наличие фуранового фрагмента. Корреляции HMBC от альдегидного протона H-6 ( δ H 9,58) до C-2 и от H-7 ( δ H 4,72) до C-2, C-3 и C-4 ( рис. 2 ) указывают на альдегидный протон. и гидроксиметильные группы, которые должны быть присоединены к C-2 и C-3 фуранового кольца соответственно. На основании приведенных выше данных соединение 2 было идентифицировано как 3-(гидроксиметил)-2-фуральдегид. Это соединение ранее было преобразовано из гликольальдегида с использованием хлорида алюминия в качестве катализатора [ 31 ].

2.2. Соединения 1 и 3 способствуют индуцированному NGF росту нейритов в клетках PC12

Сначала мы оценили нейритогенные эффекты экстракта MeOH из мицелия H. erinaceus с использованием клеток PC12, поскольку это широко используемая модель in vitro для исследований дифференцировки нейронов и роста нейритов. Экстракт (12,5–200 мкг/мл) способствовал индуцированному NGF росту нейритов в клетках PC12 ( рисунок S8 ). Затем клетки PC12 обрабатывали NGF (2 нг/мл) отдельно или в сочетании с семью выделенными соединениями в концентрациях 0,3, 3 и 30 мкМ для выявления конкретных компонентов, ответственных за нейротрофическую активность. Следовательно, 1 и 3 усиливали рост нейритов дозозависимым образом и значительно увеличивали максимальную длину нейритов в присутствии NGF ( рис. 3 а, б). Параллельно индуцированная NGF экспрессия белков-маркеров нейрональной дифференцировки (т.е. MAP2 и β3-тубулина) также явно усиливалась за счет комбинации 1 или 3 с NGF ( рис. 3c ). В совокупности эти данные показали, что соединения 1 и 3 могут эффективно индуцировать нейрогенез, когда клетки PC12 запускаются низкой концентрацией NGF. Этот вывод хорошо согласуется с другими исследованиями. Гериценоны CE из H. Erinaceus заметно усиливали рост нейритов клеток PC12 в присутствии NGF (5 нг/мл) [ 32 ]. Обработка клеток PC12 средами, кондиционированными кораллоцинами A или C, продуцируемыми астроцитами 1321N1, приводила к значительному увеличению роста нейритов [ 33 ]. Кроме того, было продемонстрировано, что увеличение активности роста нейритов в клетках PC12 под действием вышеуказанных соединений демонстрирует сильную корреляцию со стимуляцией синтеза NGF [ 32 , 33 ]. Однако эринацин А не смог стимулировать синтез NGF с или без NGF в клетках PC12 ( рисунок S9 ). Это указывало на то, что эринацин А индуцировал нейрогенез в PC12, действуя как стимул для активности NGF, а не уровня NGF.

Рисунок 3.

Влияние соединений 1 и 3 из мицелия H. erinaceus на стимулирование индуцированного фактором роста нервов (NGF) роста нейритов в клетках PC12. Клетки PC12 высевали в покрытые коллагеном 24-луночные планшеты в нормальную сывороточную среду на 24 часа, затем меняли на среду с низким содержанием сыворотки (2% HS и 1% FBS) и подвергали воздействию носителя (0,1% ДМСО) в качестве отрицательного контроля. , NGF (2 нг/мл) в качестве положительного контроля или NGF (2 нг/мл)+1 или 3 (0,3, 3, 30 мкМ) в течение дополнительных 96 часов. Масштабная линейка: 100 мкм. ( а ) Морфологию клеток наблюдали и фотографировали, как описано при анализе роста нейритов; ( б ) Клетки, несущие нейриты, и длину нейритов измеряли, как описано в анализе роста нейритов. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. ** p < 0,01, *** p < 0,001 представляют собой значительные различия по сравнению с обработанными NGF клетками PC12 (положительный контроль) (дисперсионный анализ (ANOVA) с последующим критерием Даннетта); ( в ) Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии белков маркеров нейрональной дифференцировки: β3-тубулина и MAP2 (белок 2, ассоциированный с микротрубочками). Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (ГАФД) была обнаружена в качестве контроля загрузки белка.

2.3. Соединения 1 и 3 способствуют индуцированному NGF росту нейритов путем активации пути TrkA/Erk1/2 в клетках PC12.

Сообщалось, что стимуляция клеток PC12 NGF индуцирует фосфорилирование TrkA. Фофорилированная Tyr-490 форма TrkA необходима для ассоциации Shc и активации киназного каскада Ras-MAP, который является одним из жизненно важных путей, участвующих в NGF-индуцированном росте нейритов [34 , 35 , 36 ] . Чтобы изучить возможный механизм, лежащий в основе нейротрофической активности, исследовали влияние соединений 1 и 3 на TrkA и Erk1/2.

2.3.1. Специфические ингибиторы TrkA и Erk1/2 снижают уровень соединений 1 и 3 , усиливая рост нейритов в клетках PC12.

Селективный ингибитор TrkA (k252a, 200 нМ) и ингибитор Erk1/2 (U0126, 50 нМ) добавляли за 1 час до добавления NGF и 1 или 3 , отдельно или в комбинации, в течение 96 часов. Оба антагонизма TrkA и ERK1/2 заметно снижали процент клеток, несущих нейриты ( рис. 4а ). В частности, k252a подавлял нейритогенез, индуцированный NGF и 1 или 3 , отдельно или в комбинации, на уровне, сравнимом с контролем ДМСО (около 5%). Аналогичным образом, нейритогенный эффект иридоидкататальпола из Rehmannia Glutinosa (Shengdihuang) также был полностью устранен под действием k252a в первичной культуре нейронов переднего мозга [ 37 ]. Напротив, было обнаружено, что активность усиления NGF-опосредованного роста нейритов PC12 с помощью гериценона E частично блокируется k252a [ 32 ]. Кроме того, U0126 уменьшал усиление роста нейритов соединениями 1 и 3 на 50%. Это согласуется с тем фактом, что Erk1/2 не является единственным путем, вовлеченным в NGF-индуцированный рост нейритов в клетках PC12 [ 36 ]. В совокупности это указывает на то, что NGF-индуцированный рост нейритов, стимулируемый соединениями 1 и 3 , может быть полностью TrkA-зависимым и частично Erk1/2-опосредованным
Рисунок 4.
Влияние ингибиторов TrkA и Erk1/2 на NGF-индуцированный рост нейритов и результаты фосфорилирования TrkA (тирозинкиназа А) и Erk1/2 (протеинкиназа 1/2, регулируемая экстраллюлярным сигналом) в клетках PC12 в присутствии 1 и 3 . ( а ) Значения показывают процент клеток, несущих нейриты, после 1-часовой предварительной обработки с ингибиторами или без них с последующим 96-часовым воздействием 2 нг/мл NGF или указанных агентов (с 2 нг/мл NGF). Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. ** p < 0,01, *** p < 0,001 представляют собой значительные различия по сравнению с группами без ингибиторов (ANOVA с последующим критерием Даннетта); ( б ) Вестерн-блоттинг-анализ 1 и 3 на NGF-индуцированное фосфорилирование TrkA и Erk1/2 в клетках PC12. Клетки обрабатывали NGF (2 нг/мл) и соединением 1 или 3 (3 и 30 мкМ) по отдельности или в комбинации в течение 15 минут (TrkA) или 30 минут (Erk1/2). β-актин был обнаружен как контроль загрузки белка; ( в ) Денситометрический анализ уровней фосфорилирования белков при вестерн-блоттинге ( б ). Нормализованная интенсивность соотношения фосфопротеина по сравнению с белком выражается как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. ** p < 0,01, *** p < 0,001 представляют собой значительные различия по сравнению с обработанными NGF клетками PC12 (положительный контроль) (ANOVA с последующим критерием Даннетта).

2.3.2. Соединения 1 и 3 усиливают индуцированное NGF фосфорилирование TrkA и Erk1/2 в клетках PC12.

Клетки PC12 подвергали голоданию и подвергали воздействию NGF и 1 или 3 , по отдельности или в комбинации, в течение 15 минут (TrkA) или 30 минут (Erk1/2). Фосфорилирование TrkA (Y490) и нижестоящего белка Erk1/2 анализировали с помощью вестерн-блоттинга. И 1, и 3 стимулировали NGF-индуцированное фосфорилирование TrkA (Y490) и Erk1/2 в зависимости от концентрации ( рис. 4b ,c). Предыдущие отчеты показали, что усиление фосфорилирования TrkA и/или Erk1/2 некоторыми натуральными продуктами хорошо согласуется с их способностью стимулировать рост нейритов [ 32 , 38 , 39 ]. Таким образом, прогнозируется, что соединения 1 и 3 могут опосредовать взаимодействие между NGF и его рецептором TrkA, усиливать активацию TrkA и его нижестоящую передачу сигналов Erk1/2 и, наконец, потенцировать NGF-индуцированный рост нейритов в клетках PC12.

2.4. Соединения 1 и 3 предотвратили гибель нейронально-дифференцированных клеток PC12 на фоне удаления NGF.

Дифференцированные клетки PC12 нуждаются в NGF для поддержания выживания, пролиферации и фенотипических свойств симпатических нейронов. Сообщалось, что некоторые натуральные продукты, такие как сенегенин, могут защищать нейриты дифференцированных клеток PC12 от удаления NGF [ 40 ]. Чтобы исследовать влияние соединений 1 и 3 на нейронально-дифференцированный PC12 без NGF, жизнеспособность клеток измеряли с помощью МТТ-анализа. Клетки PC12 подвергали нейронально-дифференцированной обработке NGF (30 нг/мл) в течение 7 дней. После удаления NGF клетки обрабатывали 1 и 3 в концентрациях 0,03, 0,3 и 3 мкМ, а жизнеспособность клеток измеряли через 48 часов. После отмены NGF 50–60% нейронально-дифференцированных клеток PC12 погибли через 48 часов ( рис. 5а ). В концентрации 3 мкМ клетки, обработанные 1 и 3 , повышали жизнеспособность клеток PC12, лишенных NGF, до 131% и 138% соответственно по сравнению с необработанными клетками, что сопоставимо с клетками, обработанными 20 нг/мл NGF (рис . 5 б). Эти результаты показали, что соединения 1 и 3 способны защищать дифференцированные клетки PC 12 от удаления NGF. Поскольку сообщалось, что соединение 1 защищает клетки нейробластомы мыши N2a (Neuro-2a) от стресса эндоплазматического ретикулума [ 27 ], наши результаты подтвердили нейропротекторную функцию метилового эфира 4-хлор-3,5-диметоксибензойной кислоты.
Рисунок 5.
Влияние соединений 1 и 3 на предотвращение гибели нейронально-дифференцированных клеток PC12 после удаления NGF. Клетки PC12 высевали в покрытые коллагеном 96-луночные планшеты в нормальную сывороточную среду на 24 часа, затем заменяли на среду с низким содержанием сыворотки (2% HS и 1% FBS), содержащую NGF (30 нг/мл). Через семь дней клетки PC12 подвергались воздействию носителя (0,1% ДМСО) в качестве отрицательного контроля, NGF (20 нг/мл) в качестве положительного контроля или 1, 3 (0,03, 0,3, 3 мкМ) в течение дополнительных 48 часов. Масштабная линейка: 100 мкм. ( а ) Репрезентативные изображения морфологии клеток и ( б ) жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ-анализа. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. ** p < 0,01 представляют собой значительные различия по сравнению с исходным материалом (ANOVA с последующим критерием Даннетта).

2.5. Соединение 3 индуцировало рост нейритов в первичных нейронах коры головного мозга крысы

Первичные культивируемые нейроны обладают большинством свойств нейронов in vivo. Таким образом, кортикальные нейроны крысы были выбраны для скрининга нейротрофических молекул H. erinaceum . В результате было исследовано, что соединение 3 вызывает расширение нейритов ( рис. 6а ). Максимальная длина нейритов для нейронов, обработанных 3 (3 и 30 мкМ), была значительно больше, чем у необработанных нейронов, но меньше, чем у контрольного базового фактора роста фибробластов (bFGF, 10 нг/мл) ( рис. 6b ). Эти данные показали, что соединение 3 может в некоторой степени имитировать НТ в нейронах первичной коры головного мозга крысы.
Рисунок 6.
Влияние соединения 3 на стимулирование роста нейритов в первичных культивируемых нейронах коры головного мозга крысы. Первичные нейроны коры головного мозга крысы высевали в 24-луночные планшеты, покрытые поли- 1 -лизином, в DMEM на 24 часа, затем меняли на нейробазальную среду (2% B27 и 0,5 мМ l -глутамин) и подвергали воздействию носителя (0,1% ДМСО) в качестве отрицательный контроль, bFGF (10 нг/мл) в качестве положительного контроля или 3 (0,3, 3, 30 мкМ) в течение дополнительных шести дней. Масштабная линейка: 100 мкм. ( а ) Морфологию клеток наблюдали и фотографировали , как описано в разделе 3.8 ; ( б ) Длину нейритов измеряли , как описано в разделе 3.8 . Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. ** p < 0,01 представляют собой значительные различия по сравнению с исходным материалом (ANOVA с последующим критерием Даннетта).

3. Материалы и методы.

3.1. Общие экспериментальные процедуры

ИК-спектры записывали на инфракрасном спектрофотометре JASCO FT-IR 410 (JASCO Inc.: Easton, MD, США). Эксперименты ЯМР проводили на приборе Varian Unity 600 или 500 (Varian Inc.: Пало-Альто, Калифорния, США). В качестве эталона для спектров ЯМР 1 Н и 13 С использовали дейтерированный растворитель . HREIMS и HRCIMS проводили на спектрометре MStation JMS-700 или JMX-AX 500 (JEOL Ltd.: Токио, Япония). ТСХ проводили на пластинках силикагеля 60 Ф254 и ПР-18 Ф254. ВЭЖХ выполняли на насосе JASCO PU-1580 (JASCO Inc.: Истон, Мэриленд, США), оснащенном детектором JASCO UV-1575 (JASCO Inc.: Истон, Мэриленд, США). Все растворители, использованные для экстракции и выделения, были аналитической чистоты.

3.2. Грибковые материалы

Штамм гриба H. erinaceum H6 (номер доступа DQ185914) был приобретен в Научно-исследовательском институте прикладной микробиологии Академии сельскохозяйственных наук, Синьцзян, Китай. Он был идентифицирован на основе анализа последовательности 16S рДНК со сходством 99% компанией Beijing Sunbiotech Co. и был депонирован в Ключевой лаборатории натуральных продуктов и химической биологии Шэньси Северо-Западного университета A и F. H. erinaceus культивировали на скошенном картофельно-декстрозном агаре при 25°C в течение 10 дней. Агаровые пробки инокулировали в колбу Эрленмейера емкостью 500 мл, содержащую 120 мл культуральной среды, и инкубировали при 25 °C на ротационной шейкере со скоростью 100 об/мин в течение 10 дней. Компоненты культуральной среды были следующими: глюкоза 0,4%, солодовый экстракт 1%, дрожжевой экстракт 0,4% на дистиллированной воде. Перед стерилизацией культуральную среду доводили до pH 6,5. Масштабную ферментацию проводили в колбах Эрленмейера емкостью 40 × 500 мл, каждая из которых содержала 80 г риса и 120 мл дистиллированной воды. В каждую колбу инокулировали 5,0 мл культуральной среды и инкубировали при 25°С в течение 40 дней.

3.3. Извлечение и изоляция

Мицелий H. erinaceus был извлечен и изолирован, как сообщалось ранее, с небольшими модификациями [ 41 ]. Вкратце, экстракт МеОН (45 г) суспендировали в воде и затем распределяли между EtOAc и н-BuOH. Фракцию EtOAc (4,41 г) подвергали хроматографии на колонке с силикагелем (CC) с использованием CHCl 3 –MeOH (20:1, 9:1, 7:3, 5:5) с получением четырех фракций (E1–E4).
Фракцию Е1 (116 мг) разделяли на силикагеле CC, элюируя смесью гексан-EtOAc (4:1, 2:1, 1:1), с получением пяти фракций (E11–E15). Фракцию E11 разделяли колоночной хроматографией ODS (CC) с использованием 90% MeOH в воде и затем очищали препаративной ТСХ с использованием гексана-EtOAc (5:1) с получением соединения 1 (8 мг ) . Фракцию Е2 (982 мг) обрабатывали силикагелем CC, элюируя CHCl 3 -EtOAc (2:1, 1:1), и получали десять фракций (E21–E30). Соединение 2 (29,6 мг) получали из фракции Е24 (80 мг) силикагелем CC с использованием CHCl 3 -EtOAc (9:1). Фракцию E29 (82 мг) разделяли с помощью ODS CC с использованием MeOH-H 2 O (3:7, 5:5, 7:3) и затем очищали с помощью ОФ-ВЭЖХ с использованием MeOH-H 2 O (9:1) с получением 3 (6 мг). Фракцию Е3 (1,215 г) разделяли на силикагеле CC, элюируя смесью CHCl 3 -MeOH-H 2 O (7:3:0,5), с получением двух фракций (E31, E32). Фракцию Е31 (956 мг) разделяли на силикагеле CC с использованием гексана-EtOAc (1:4, 0:1) с получением четырех фракций (E311–E314). Фракцию 314 (276 мг) разделяли на сефадексе LH-20 CC, элюируя МеОН, и получали три фракции (Е3141–Е3143). Фракцию 3142 (71 мг) далее разделяли с помощью ODS CC, элюируя смесью MeOH-H 2 O (1:2), с получением трех фракций (E31421–E31423). Соединение 4 (5 мг) получали из фракции E31421 (32 мг) методом ОФ-ВЭЖХ с использованием 5% ацетонитрила в воде. Соединение 5 (10 мг) получали из фракции Е32 (215 мг) методом ОФ-ВЭЖХ с использованием MeOH-H 2 O (4:6). Фракцию Е4 (1,08 г) разделяли с помощью ODS CC с использованием MeOH-H 2 O (5:5, 7:3) с получением трех фракций (E41–E43). Фракцию E41 (459 мг) разделяли на силикагеле CC, элюируя смесью EtOAc-MeOH (9:1), с получением двух фракций (E411, E412). Фракцию E412 (112,2 мг) разделяли на силикагеле CC с использованием CHCl 3 -MeOH (9:1) и затем очищали с помощью ОФ-ВЭЖХ с использованием 10% МеОН в воде с получением 6 (1 мг). Фракцию Е42 (384 мг) разделяли на силикагеле CC с использованием градиента CHCl 3 -MeOH (20:1, 10:1) с получением четырех фракций (E421–E424). Фракцию 421 (116,3 мг) далее разделяли ODS CC с использованием MeOH-H 2 O (1:1) с получением трех фракций (E4211–E4213). Соединение 7 (2 мг) получали из фракции Е4213 (24,8 мг) на силикагеле CC, элюируя CHCl 3 -EtOAc (1:5).
Соединение 2 (=3-(гидроксиметил)-2-фуральдегид): желтое масло; 1 H ЯМР (CD 3 OD, 500 М Гц) δ 4,72 (2H, с, H-7), 6,52 (1H, д, J = 3,5 Гц, H-4), 7,22 (1H, д, J = 3,5 Гц) , H-5), 9,58 (1H, с, H-6); ЯМР 13 С (CD 3 OD, 125 М Гц) δ 57,8 (С-7), 110,2 (С-4), 123,0 (С-5), 152,5 (С-2), 160,8 (С-3), 177,9 ( С-6); ЭИМС (отн.инт) м / з 126[М] + (100); HREIMS m / z 126,0315 [М] + (рассчитано для C 6 H 6 O 3 , 126,0317).
Ацетилирование соединения 5 . К раствору 5 (3 мг) в пиридине (1 мл) добавляли уксусный ангидрид (1 мл) и смесь выдерживали при комнатной температуре в течение 24 часов. Реакционную смесь концентрировали досуха, остаток очищали на силикагеле CC с использованием EtOAc, получая новый диацетат 5а (2,1 мг) в виде грязно-белой смолы. 1 H ЯМР (CDCl 3 , 500 М Гц) δ 1,50 (3H, д, J = 6,0 Гц), 2,10 (3H, д, J = 3,0 Гц), 2,16 (3H, д, J = 1,5 Гц), 4,90 ( 2H, с), 5,90 (1H, дд, J =6,5, 1 Гц), 6,36 (1H, с), 7,79 (1H, д, J =0,5 Гц); 13 CNMR (CDCl 3 , 125 М Гц) δ 19,9, 20,6, 21,2, 61,1, 65,7, 114,7, 129,6, 151,9, 162,2, 169,6, 169,9, 176,8; HRCIMS m / z 255,0874 [M + H] + (рассчитано для C 12 H 15 O 6 , 255,0863).
Соединение 6 : аморфный белый порошок; ИК (пленка) ν max 3354 (OH, NH), 1659 (C=O), 1626, 1541, 1507, 1370, 1215, 1067 см- 1 ; Данные 1 Н ЯМР (CDCl 3 , 600 М Гц) и 13 С ЯМР (CDCl 3 , 150 М Гц), таблица 1 ; ЦИМС м / з 168 [М+Н] + ; HRCIMS m / z 168,0658 [M+H] + (рассчитано для C8H10NO3: 168,0655).

3.4. Культура клеток

Клетки PC12 были получены из лаборатории профессора Ёсиясу Фукуямы и выращивались в модифицированной среде Игла Дульбекко с высоким содержанием глюкозы (DMEM) с 10% инактивированной нагреванием лошадиной сыворотки (Gibco BRL Co.Ltd.: Гейтерсбург, Мэриленд, США), 5% инактивированная фетальная бычья сыворотка (Gibco BRL), 1% пенициллин/стрептомицин. Клетки культивировали в атмосфере с 5% CO 2 при 37°С.
Первичные нейроны коры головного мозга крысы были приобретены у Gibco BRL. Клетки высевали в 24-луночные планшеты, покрытые поли- 1 -лизином (Sigma-Aldrich Inc.: Сент-Луис, Мичиган, США), с плотностью 2 × 10 4 клеток/мл. Через 24 часа среду заменяли средой Neurobasal с добавлением B27 (2%), l -глутамина (0,5 мМ) и 1% пенициллина/стрептомицина. Клетки хранили во влажном инкубаторе с 5% CO 2 .

3.5. МТТ-анализ жизнеспособности клеток

Клетки PC12 высевали в покрытые коллагеном 96-луночные планшеты с плотностью 8 × 10 3 клеток/мл. Через 24 ч культуральную среду заменяли дифференциальной средой, содержащей 30 нг/мл NGF, на семь дней. После удаления NGF клетки обрабатывали соединениями в течение 48 часов. Затем клетки инкубировали с МТТ (0,5 мг/мл) в течение 2 ч при 37 °С. Среду осторожно удаляли и в каждую лунку добавляли по 100 мкл смеси 50% ДМСО/50% этанола. Поглощение измеряли при 560 нм с помощью микропланшет-ридера. Результаты выражали в процентах снижения МТТ, предполагая, что поглощение контрольного образца составляло 100%.

3.6. Анализ роста нейритов клеток PC12

Рост нейритов измеряли, как сообщалось ранее [ 42 , 43 ]. Вкратце, клетки PC12 высевали в покрытые поли- 1 -лизином 24-луночные планшеты с плотностью 8 × 10 3 клеток/мл с нормальной сывороточной средой в течение 24 часов, а затем обрабатывали лекарственными средствами и NGF, по отдельности или в комбинации. Клетки PC12 фотографировали с помощью инвертированного микроскопа и исследовали на процентное содержание клеток, несущих нейриты, относительно общего числа клеток в поле или на среднее значение максимальной длины нейритов в отдельных клетках.

3.7. Вестерн-блоттинг-анализ

Клетки PC12 (1 × 10 6 клеток/мл) высевали в шестилуночные планшеты, покрытые поли- 1 -лизином, в нормальную сывороточную среду на 24 часа, затем переносили в среду с низким содержанием сыворотки на 14 часов перед воздействием носителя (0,1% ДМСО) или указанные реагенты. Клетки лизировали на льду в течение 30 минут в буфере RIPA, 10 мМ PMSF (Институт биотехнологии Beyotime, Шанхай, Китай), 1% коктейле белковых ингибиторов (Sigma-Aldrich China Inc.: Шанхай, Китай). Лизаты центрифугировали при 14 000 об/мин в течение 15 мин при 4°С. Концентрацию белка измеряли с помощью набора для анализа белка BCA (Solarbio Science and Technology Co., Ltd., Пекин, Китай). Каждый образец (30 мкг) разделяли с помощью SDS-PAGE в 8–12% гелях, переносили на мембрану из ПВДФ (0,45 мкм, Solarbio Science and Technology Co., Ltd.: Пекин, Китай). Мембраны блокировали при комнатной температуре в 5% БСА в ТБСТ (20 мМ Трис-HCl, 150 мМ NaCl, 0,1% Твин 20 (Полисорбат 20)) в течение 1 часа. Блоты инкубировали с соответствующими первичными антителами (Cell Signaling Technology, Inc., Беверли, Массачусетс) в течение ночи при 4 °C, детектировали с помощью вторичных антител, конъюгированных с HRP (Институт биотехнологии Бейотайм, Шанхай, Китай) в течение 1 часа при комнатной температуре и окончательно визуализировали с помощью хемилюминесцентных реагентов ECL (Институт биотехнологии Бейотайм: Шанхай, Китай).

3.8. Иммуноцитохимическое окрашивание

Первичные нейроны коры головного мозга крысы высевали на 24-луночный планшет, покрытый поли- 1 -лизином, на 24 часа и обрабатывали соединениями в полной нейробазальной среде. Через шесть дней клетки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 20 мин, блокировали в 0,3% H 2 O 2 в течение 20 мин, пермеабилизировали 0,1% тритоном Х-100 в течение 20 мин. Затем клетки инкубировали с антителом против MAP2 в PBS при 4°C в течение ночи. Связанные антитела детектировали с помощью вторичных антител в течение 60 минут при комнатной температуре. Клетки окрашивали 3,3′-даминобензидином (DAB), фотографировали с помощью инвертированного микроскопа и исследовали путем измерения длины самого длинного нейрита в каждой клетке. Клетки, обработанные bFGF (10 нг/мл), служили положительным контролем.

3.9. Статистический анализ

Данные выражали как среднее значение ± стандартная ошибка (SD). Все эксперименты проводились не менее трех раз. Результаты были проанализированы с помощью ANOVA с последующим критерием Даннетта, при этом p < 0,01 и p < 0,001 принимались за значимую разницу.

4. Выводы

В настоящем исследовании были выявлены одно новое соединение 6 и один новый природный продукт 2 из культивированного мицелия H. erinaceus . Два известных соединения, 1 и 3, были исследованы с новой нейротрофической и нейропротекторной активностью. В частности, соединения 1 и 3 могут эффективно защищать нейронально-дифференцированные клетки PC12 от лишения NGF. Соединение 3 может имитировать ограниченную нейритогенную активность НТ в нейронах первичной коры головного мозга крыс. Соединения 1 и 3, очевидно, также могут усиливать NGF-индуцированный рост нейритов независимо от стимуляции синтеза NGF в клетках PC12. Более того, анализ клеточных сигнальных путей показал, что NGF-индуцированный рост нейритов, потенцируемый соединениями 1 и 3, полностью опосредован TrkA и частично Erk1/2-зависим. В совокупности эти факты укрепляют представление о том, что Hericium erinaceus является потенциальным агентом для снижения риска различных нейродегенеративных заболеваний, что может предложить полезные преимущества для помощи в разработке новых лекарств против этих заболеваний.
Благодарности

Работа выполнена при финансовой поддержке Фонда естественных наук Китая (21572182), Специализированного исследовательского фонда докторской программы высшего образования (20120204110029), Научного фонда китайских университетов (2452016095) и Программы студенческого инновационного эксперимента (081071230). . Мы благодарим Масами Танаку и Ясуко Окамото (TBU) за измерение данных ЯМР-спектроскопии и масс-спектроскопии.
Вклад автора

Ёсиясу Фукуяма, Цзинь-Мин Гао и Чэнь-Ю Цао задумали и спланировали эксперименты; Ченг-Чен Чжан провел эксперименты; Чэнь-Ю Цао проанализировал данные; Кеничи Харада, Мива Кубо и Си-Тао Ян предоставили реагенты/материалы/инструменты анализа; и Цзинь-Мин Гао и Чэнь-Юй Цао написали статью.
Конфликт интересов

Авторы объявили, что нет никаких конфликтов интересов.
Рекомендации

  1. Каплан, Д.Р.; Стивенс, Р.М. Передача сигнала нейротрофина с помощью рецептора Trk. Дж. Нейробиол. 1994 , 25 , 1404–1417. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  2. Акаги, М.; Мацуи, Н.; Акаэ, Х.; Хирасима, Н.; Фукуиси, Н.; Фукуяма, Ю.; Акаги, Р. Непептидные нейротрофические агенты, полезные при лечении нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера. Дж. Фармакол. наук. 2015 , 127 , 155–163. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  3. Тивари, СК; Чатурведи Р.К. Пептидная терапия при нейродегенеративных заболеваниях. Курс. Мед. хим. 2014 , 21 , 2610–2631. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  4. Аллен, С.Дж.; Уотсон, Джей-Джей; Шумарк, Дания; Баруа, НУ; Патель, NK GDNF, NGF и BDNF как варианты лечения нейродегенерации. Фармакол. Там. 2013 , 138 , 155–175. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  5. Сюй, CJ; Ван, Дж.Л.; Джин, В.Л. Новая терапевтическая роль NGF при болезни Альцгеймера. Нейрохим. Рез. 2016 , 41 , 1211–1218. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  6. Ченг, X.; Харцдорф, Н.; Хаинг, З.; Канг, Д.; Камелио, AM; Шоу, Т.; Шмидт, CE; Сигел, Д. Рост нейронов, способствующий сесквитерпен-неолигнанам; синтезы и биологические исследования. Орг. Биомол. хим. 2012 , 10 , 383–393. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  7. Ши, XW; Лю, Л.; Гао, Дж. М.; Чжан, А.Л. Циатановые дитерпены из китайского гриба Sarcodon scabrosus и их активность, способствующая росту нейритов. Евро. Дж. Мед. хим. 2011 , 46 , 3112–3117. [ Академика Google ]
  8. Гао, Дж. М. Новые биологически активные метаболиты высших грибов Китая. Курс. Орг. хим. 2006 , 10 , 849–871. [ Академика Google ]
  9. Лу, QQ; Тиан, Дж. М.; Вэй, Дж.; Гао, Дж. М. Биоактивные метаболиты мицелия базидиомицета Hericium erinaceum . Нат. Прод. Рез. 2014 , 28 , 1288–1292. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  10. Тонгбай, Б.; Рапиор, С.; Хайд, К.Д.; Виттштейн, К.; Стадлер, М. Hericium erinaceus , удивительный лекарственный гриб. Микол. Прог. 2015 , 14 , 91–113. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  11. Фридман, М. Химия, питание и полезные для здоровья свойства плодовых тел и мицелия грибов Hericium erinaceus (Львиная грива) и их биоактивных соединений. Дж. Агрик. Пищевая хим. 2015 , 63 , 7108–7123. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  12. Чжан, CC; Инь, Х.; Цао, Кипр; Вэй, Дж.; Чжан, К.; Гао, Дж. М. Химические компоненты Hericium erinaceus и их способность стимулировать опосредованный NGF рост нейритов на клетках PC12. Биоорг. Мед. хим. Летт. 2015 , 25 , 5078–5082. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  13. Фан, CW; Дэвид, П.; Найду, М.; Вонг, К.Х.; Сабаратнам, В. Терапевтический потенциал кулинарно-лекарственных грибов для лечения нейродегенеративных заболеваний: разнообразие, метаболиты и механизмы. Крит. Преподобный Биотехнология. 2015 , 35 , 355–368. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  14. Мори, К.; Обара, Ю.; Хирота, М.; Азуми, Ю.; Кинугаса, С.; Инатоми, С.; Накахата, Н. Активность Hericium erinaceus , индуцирующая фактор роста нервов, в клетках астроцитомы человека 1321N1. Биол. Фарм. Бык. 2008 , 31 , 1727–1732. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  15. Лай, Польша; Найду, М.; Сабаратнам, В.; Вонг, К.Х.; Дэвид, РП; Куппусами, УР; Абдулла, Н.; Малек, СНА Нейротрофические свойства лекарственного гриба Львиная грива Hericium erinaceus (Высшие базидиомицеты) из Малайзии. Межд. Дж. Мед. Грибы 2013 , 15 , 539–554. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  16. Мори, К.; Инатоми, С.; Оучи, К.; Азуми, Ю.; Тучида, Т. Улучшение воздействия гриба Ямабушитаке ( Hericium erinaceus ) на легкие когнитивные нарушения: двойное слепое плацебо-контролируемое клиническое исследование. Фитотер. Рез. 2009 , 23 , 367–372. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  17. Мори, К.; Обара, Ю.; Мория, Т.; Инатоми, С.; Накахата, Н. Влияние Hericium erinaceus на дефицит обучения и памяти у мышей, вызванный бета-амилоидным пептидом (25–35). Биомед. Рез. 2011 , 32 , 67–72. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  18. Вонг, К.Х.; Найду, М.; Дэвид, РП; Абдулла, Массачусетс; Абдулла, Н.; Куппусами, УР; Сабаратнам, В. Повышение функционального восстановления после повреждения малоберцового нерва грызунов грибом Львиная грива, Hericium erinaceus (Бюллетень: Фр.), Перс. (Афиллофоромицетидеа). Межд. Дж. Мед. Грибы 2009 , 11 , 225–236. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  19. Кавагиси, Х.; Чжуан К. Соединения Hericium erinaceum от деменции . Будущее наркотиков 2008 , 33 , 149–155. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  20. Тан, HY; Инь, Х.; Чжан, CC; Цзя, К.; Гао, Дж. М. Структурное разнообразие, синтез и биологическая активность циатандитерпеноидов у высших грибов. Курс. Мед. хим. 2015 , 22 , 2375–2391. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  21. Ма, Би Джей; Шен, JW; Ю, HY; Руан, Ю.; Ву, ТТ; Чжао, X. Гериценоны и эринацины: стимуляторы биосинтеза фактора роста нервов (NGF) у Hericium erinaceus . Микология 2010 , 1 , 92–98. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  22. Шимбо, М.; Кавагиси, Х.; Ёкогоши, Х. Эринацин А увеличивает содержание катехоламинов и факторов роста нервов в центральной нервной системе крыс. Нутр. Рез. 2005 , 25 , 617–623. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  23. Чанг, Швейцария; Чен, Ю.; Да, ХХ; Чен, HX; Ким, JX; Чанг, CC; Пэн, CC; Пэн, Р.Ю. Повышение продуктивности эринацина А в мицелии Hericium erinaceus и его нейропротекторной биологической активности против апоптоза, вызванного глутаматом. LWT Food Sci. Технол. 2016 , 65 , 1100–1108. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  24. Ли, К.Ф.; Чен, Дж. Х.; Дэн, CC; Шен, Швейцария; Се, MC; Лу, CC; Ли, КЦ; Ли, Л.И.; Чен, В.П.; Чен, CC; и другие. Защитные эффекты мицелия Hericium erinaceus и выделенного из него эринацина А против гибели нейронов, вызванной ишемией-повреждением, посредством ингибирования iNOS/p38 MAPK и нитротирозина. Межд. Дж. Мол. наук. 2014 , 15 , 15073–15089. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  25. Цай-Тэн, Т.; Чин-Чу, К.; Ли-Я, Л.; Ван-Пин, К.; Чунг-Куанг, Л.; Чиен-Чанг, С.; Чи-Ин, ВЧ; Чиен-Чи, К.; Шиао, Ю. Дж. Эринацин А-обогащенный мицелий Hericium erinaceus улучшает состояние патологий, связанных с болезнью Альцгеймера, у трансгенных мышей APPswe/PS1dE9. Дж. Биомед. наук. 2016 , 23 , 49. [ Google Scholar ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  26. Куо, ХК; Лу, CC; Шен, Швейцария; Тунг, Ю.Ю.; Се, MC; Ли, КЦ; Ли, Л.И.; Чен, CC; Дэн, CC; Хуанг, WS; и другие. Мицелий Hericium erinaceus и выделенный из него эринацин А. Защита от нейротоксичности, вызванной MPTP, посредством стресса ER, запускающего каскад апоптоза. Дж. Перевод. Мед. 2016 , 14 , 78. [ Google Scholar ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  27. Уэда, К.; Кодани, С.; Кубо, М.; Масуно, К.; Секия, А.; Нагай, К.; Кавагиши, Х. Соединения, подавляющие стресс эндоплазматической сети (ЭР), из остатков культивирования гриба Hericium erinaceum . Биология. Биотехнология. Биохим. 2009 , 73 , 1908–1910. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  28. Кавагиси, Х.; Шимада, А.; Шираи, Р.; Окамото, К.; Одзима, Ф.; Сакамото, Х.; Исигуро, Ю.; Фурукава, С. Эринацины A, B и C, сильные стимуляторы синтеза фактора роста нервов (NGF), из мицелия Hericium erinaceum . Тетраэдр Летт. 1994 , 35 , 1569–1572. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  29. Цянь, ФГ; Сюй, ГЯ; Ду, С.Дж.; Ли, М.Х. Выделение и идентификация двух новых соединений пирона из культуры Herictum erinaceus . Яо Сюэ Сюэ Бао 1990 , 25 , 522–525. [ Академия Google ] [ PubMed ]
  30. Ван, К.; Бао, Л.; Ци, К.; Чжао, Ф.; Ма, К.; Пей, Ю.; Лю, Х. Erinacerins CL, изоиндолин-1-оны с ингибирующей α-глюкозидазу активностью из культур лекарственного гриба Hericium erinaceus . Дж. Нэт. Прод. 2015 , 78 , 146–154. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  31. Швидерски, М.; Крузе, А. Каталитическое действие хлорида алюминия на примере превращения модельных соединений сахаров. Дж. Мол. Катал. 2015 , 402 , 64–70. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  32. Фан, CW; Ли, Г.С.; Хонг, SL; Вонг, Ю.Т.; Бркляча, Р.; Урбан, С.; Абд Малек, СН; Сабаратнам, V. Hericium erinaceus (Бюлл.: Фр.) Перс. культивирование в тропических условиях: выделение гериценонов и демонстрация NGF-опосредованного роста нейритов в клетках PC12 через сигнальные пути MEK/ERK и PI3K-Akt. Функция питания. 2014 , 5 , 3160–3169. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  33. Виттштейн, К.; Рашер, М.; Рупчич, З.; Лёвен, Э.; Зима, Б.; Кестер, RW; Стадлер, М. Кораллоцины AC, метаболиты гриба Hericium coralloides , индуцирующие рост нервов и нейротрофический фактор головного мозга . Дж. Нэт. Прод. 2016 , 79 , 2264–2269. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  34. Ланге-Картер, Калифорния; Джонсон, Г.Л. Ras-зависимая регуляция киназы MEK фактором роста в клетках PC12. Наука 1994 , 265 , 1458–1461. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  35. Чао, М.В.; Хемпстед, BL p75 и Trk: система с двумя рецепторами. Тенденции Неврологии. 1995 , 18 , 321–326. [ Академия Google ] [ CrossRef ]
  36. Водри, Д.; Сторк, Пи Джей; Лазарович, П.; Эйден, Л.Е. Сигнальные пути для дифференцировки клеток PC12: создание правильных связей. Наука 2002 , 296 , 1648–1649. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  37. Ван, З.; Лю, К.; Чжан, Р.; Лю, С.; Ся, З.; Ху, Ю. Каталпол улучшает вызванную бета-амилоидом дегенерацию холинергических нейронов за счет повышения нейротрофических факторов головного мозга. Нейронаука 2009 , 163 , 1363–1372. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  38. Ченг, Л.Х.; Йе, Й.; Сян, Л.; Осада, Х.; Ци, Дж. Х. Линдерсин B из ракообразных Lindernia индуцирует нейрогенез путем активации сигнального пути тирозинкиназы А/фосфатидилинозитол-3-киназы/внеклеточного сигнал-регулируемого киназного пути. Фитомедицина 2017 , 24 , 31–38. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  39. Чжао, Дж.; Ченг, ГГ; Фан, В.; Ян, CB; Да, Сан-Франциско; Кюи, В.; Вэй, В.; Лаос, LX; Кай, Дж.; Хан, Ю.Ф.; и другие. Растительный препарат пуэрарин координирует свои действия с фактором роста нервов в регуляции выживания нейронов и нейритогенеза посредством активации сигнальных путей ERK1/2 и PI3K/Akt в процессе расширения нейритов. Нейроны ЦНС. Там. 2015 , 21 , 61–70. [ Академия Google ] [ PubMed ]
  40. Джески, Р.; Чен, Х. Нейритогенный и нейропротекторный потенциал сенегенина против Aβ-индуцированной нейротоксичности в клетках PC 12. Дополнение БМК. Альтернативный. Мед. 2016 , 16 , 26. [ Google Scholar ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  41. Гао, Дж. М.; Шен, Дж.; Чжан, Алабама; Чжу, В.; Чжан, X.; Лю, Дж. К. Химические компоненты гриба Leccinum extremiorientale . Подбородок. Дж. Орг. хим. 2003 , 23 , 853–857. [ Академика Google ]
  42. Кубо, М.; Исии, Р.; Ишино, Ю.; Харада, К.; Мацуи, Н.; Акаги, М.; Като, Э.; Хосода, С.; Фукуяма, Ю. Оценка компонентов плодов Piper Retrofractum на нейротрофическую активность. Дж. Нэт. Прод. 2013 , 76 , 769–773. [ Академия Google ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  43. Бай, Р.; Чжан, CC; Инь, Х.; Вэй, Дж.; Гао, Дж. М. Циатановые дитерпеноиды с нейротрофической активностью из культур грибов. Дж. Нэт. Прод. 2015 , 78 , 783–788.
– – – – –